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廣譽(yù)遠定坤丹的藥效物質(zhì)研究最新進(jìn)展

來(lái)源： 日期：2022-03-04 瀏覽：7414


定坤丹始于乾隆四年（1739年），是我國治療各種婦科疾病的古代經(jīng)典名方。2004年，廣譽(yù)遠定坤丹處方和工藝技術(shù)被科學(xué)技術(shù)部和國家保密局列為秘密級國家秘密技術(shù)。據了解，廣譽(yù)遠定坤丹由30味古法炮制中藥材加蜂蜜制作而成，具有滋補氣血、調經(jīng)舒郁的功效，在臨床上常用于治療氣血兩虛、氣滯血瘀所致的月經(jīng)不調、行經(jīng)腹痛、崩漏下血、赤白帶下、血暈血脫、產(chǎn)后諸虛、骨蒸潮熱等。



為了進(jìn)一步闡明定坤丹的藥效作用機制，海軍軍醫大學(xué)張衛東教授團隊開(kāi)展了系列針對性研究，并先后在Biomedical Chromatography雜志發(fā)表題為“Systematic characterization of the chemical constituents in vitro and prototypes in vivo of Dingkun Dan by UPLC-Q-TOF/MSE combined with the UNIFITM software”和“In vivo and in vitro metabolism study of traditional Chinese medicine formula Dingkun Dan in rats by using ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry”的兩篇研究論文，揭示了定坤丹的藥效物質(zhì)基礎。



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新技術(shù)鑒定出21個(gè)新成分


為了明確定坤丹全方的化學(xué)成分，研究團隊采用UPLC-Q-TOF/MSE對各樣品進(jìn)行數據采集，將所得質(zhì)譜數據及自建數據庫導入UNIFI?數據分析平臺，對數據進(jìn)行化合物的匹配鑒定。經(jīng)標準品比對，文獻查閱及質(zhì)譜信息分析，最終共鑒定了定坤丹的234個(gè)化學(xué)成分（圖1），包括47個(gè)三萜皂苷類(lèi)化合物，55個(gè)黃酮類(lèi)化合物，38個(gè)生物堿類(lèi)化合物及其他類(lèi)化合物，其中63個(gè)化合物使用標準品比對確認(圖2)，6個(gè)聯(lián)苯環(huán)辛烯類(lèi)成分和15個(gè)亞精胺類(lèi)成分為首次在定坤丹中鑒定，并總結了皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)、萜類(lèi)及苯丙素類(lèi)化合物的裂解規律。



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（圖注：圖1. 定坤丹化學(xué)成分的BPI色譜圖（A：正離子模式，B：負離子模式））




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（圖注：圖2. 定坤丹中63個(gè)對照品的化學(xué)結構圖）





體內代謝研究揭示潛在藥效成分


根據血清藥物化學(xué)理論，大鼠口服定坤丹后的入血成分才最有可能是潛在的與藥效相關(guān)的成分。隨后，研究團隊開(kāi)展大鼠口服定坤丹后血漿、尿液、糞便的原型成分和代謝產(chǎn)物的檢測與分析。他們采用了UPLC-Q-TOF/MSE 技術(shù)對各生物樣本進(jìn)行數據采集，將數據導入UNIFI?數據處理平臺，利用提取離子流方法提取定坤丹的化學(xué)成分，并結合質(zhì)譜信息鑒定在體內經(jīng)吸收的原型成分。利用以上技術(shù)和方法，共鑒定體內原型成分140個(gè)，其中從血漿中鑒定43個(gè)，尿液中鑒定101個(gè)，糞便中鑒定110個(gè)。同時(shí)，通過(guò)建立代謝物分析方法對可能的代謝產(chǎn)物進(jìn)行預測，利用UNIFI?平臺進(jìn)行代謝產(chǎn)物的篩選和匹配。本研究首次對定坤丹的體內代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析，最終鑒定出代謝產(chǎn)物121個(gè)，其中血漿中包含93個(gè)，尿液中包含86個(gè)，糞便中包含30個(gè)。代謝反應類(lèi)型主要包括羥基化反應、氧化反應、水解反應、甲基化反應、葡萄糖醛酸化反應和硫酸化反應等（圖3）。由于黃酮類(lèi)化合物和苯丙素類(lèi)化合物是定坤丹中代謝物最豐富的活性成分，通過(guò)體外代謝研究平臺，對五個(gè)不同類(lèi)型的代表性成分甘草素、黃芩苷、芫花素、阿魏酸和藁本內酯的代謝產(chǎn)物進(jìn)行驗證，共檢測到9個(gè)代謝物，與推測的分析結果一致。

通過(guò)對定坤丹體內外化學(xué)成分的分析與鑒定，本研究揭示了化學(xué)物質(zhì)基礎及潛在的藥效成分，也有助于更好地了解定坤丹的化學(xué)成分在體內的吸收及生物轉化過(guò)程，為臨床用藥安全提供理論基礎。



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（圖注：圖3. 定坤丹中各類(lèi)成分可能的代謝途徑圖）



 

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